Друга информация
1. Приложение 4
2. Литературен обзор 5
2.1 Устройство на око 5
1.2. Бестрофинопатии 7
2.2.1. Вителиформна макулна дистрофия на Бест 8
2.2.2. Вителиформна макулна дистрофия, свързана с възрастта 11
2.2.3. Автозомна доминантна витреоретинохороидопатия 11
2.2.4. Автозомна рецесивна бестрофинопатия 12
2.2.5. Макулна дегенерация, свързана с възрастта 12
2.3. Генът BEST1 12
2.4. Белтъкът бестрофин-1 13
2.4.1. Паралози на белтъка бестрофин-1 и филогенетични връзки 13
2.4.2. Стуктура и разположение на бестрофин-1 в мембраната 14
2.4.3. Експресия на бестрофин-1 в тъканите 16
2.4.4. Експресия на бестрофин-1 по време на ембрионалното развитие 16
2.5. Функция и физиологична роля на бестрофините 17
2.5.1. Бестрофин-1 като йонен канал 17
2.5.2. Участие на бестрофин-1 при провеждане на сигнали в нервната система 18
2.5.3. Влияние на бестрофин-1 върху обема на клетката 19
2.6. Регулация на активността на човешки бестрофин-1 20
2.6.1. Регулация на активността на човешки бестрофин-1 чрез Ca2+йони 20
2.6.2. Регулация на бестрофин-1 чрез фосфорилиране 20
2.6.3. Взаимодействие на бестрофин-1 с други белтъци 21
3. Цели и задачи 22
4. Материали и методи 23
4.1. Клетъчно култивиране 23
4.2. Приготвяне на клетъчни лизати 23
4.3. SDS-PAGE и имунодетекция (Western blot) 23
4.4. Диализа 25
4.5. Афинитетна хроматография 25
4.6. Молекулно-ситова хроматография и FPLC 26
4.7. Брюстер - ъглова микроскопия (Brewster Angle Microscope, BAM) 26
5. Резултати и обсъждане 28
5.1. Имунодетекция на бестрофин-1 в стабилно трансфектирани MDCK II – hBest1 клетки
5.2. Оптимизиране на протокол за пречистване на човешки бестрофин-1 28
30
5.3. Взаимодействие на изолирания и пречистен бестрофин-1 с липиден монослой от 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (POPC)
37