Друга информация
Съдържание:

Увод…………………………………………………………………………………………………...4
1. Литературен обзор………………………………………………………………………………...6
1.1.Устройство на око………………………………………………………………………………..6
1.2. Бестрофинопатии………………………………………………………………………………..9
1.2.1.Вителиформна макулна дистрофия на Бест (BVMD)………………………………………10
1.2.2.Вителиформна макулна дистрофия, свързана с възрастта (AVMD)……………………....13
1.2.3.Автозомна доминантна витреоретинохороидопатия (ADVRIC)…………………………..13
1.2.4.Автозомна рецесивна бестрофинопатия (ARB)……………………………………………..14
1.2.5.Макулна дегенерация, свързана възрастта (AMD)……………………………………….....14
1.2.6.Пигментен ретинит (RP)……………………………………………………………………...14
1.3. Генът BEST1……………………………………………………………………………………15
1.4. Белтъкът бестрофин-1………………………………………………………………………….16
1.4.1. Паралози на бестрофина……………………………………………………………………..16
1.4.2. Стуктура и разположение на бестрофин-1 в мембраната……………………………….....16
1.5. Функция и физиологична роля на бестрофините.....................................................................22
1.5.1. Бестрофин-1 като йонен канал................................................................................................22
1.5.2. Участие на бестрофин-1 при провеждане на сигнали в нервната система.........................22
1.6. Клетъчна поляризация.................................................................................................................24
1.6.1. Особености на полярните клетки............................................................................................25
2. Цели и задачи..................................................................................................................................29
3. Материали и методи.......................................................................................................................30
3.1 Клетъчно култивиране.................................................................................................................30
3.2 Имунофлуоресценция..................................................................................................................30
3.3 Приготвяне на клетъчни лизати..................................................................................................31
3.4 Диализа..........................................................................................................................................31
3.5 Изолиране и пречистване на Best1..............................................................................................31
3.5.1 Молекулно-ситова хроматография и FPLC.............................................................................32
3.5.2 Афинитетна хроматография.............................................................................................32
3.6 Определяне количество белтък по метода на Smith............................................................33
3.7 Полиакриламидна гел електрофореза (SDS-PAGE) и имунодетекция (Western blot)..........33
3.8 Измерване на изотерми двумерно налягане – молекулна площ и хистерезисни криви при свиване и разширение на монослоеве от бестрофин-1 и сфингомиелин.................................35
3.9. Изолиране на детергент-резистентни домени от MDCKⅠⅠ и MDCKⅠⅠ-Best1......................40
4. Резултати и дискусия...............................................................................................................41
4.1. Получаване на hBest1 от стабилно трансфектирана MDCKII клетъчна линия...................41
4.2. Изолиране и пречистване на hBest1 от стабилно трансфектирана MDCKII клетъчна линия...........................................................................................................................................41
4.3. Ефекти на Ca2+, Glu и GABA върху физикохимичните характеристики на моделни мембрани, съставени от hBest1 и SM.......................................................................................44
4.3.1. Ефекти на Ca2+, Glu и GABA върху еднокомпонентни монослоеве от пречистен hBest1.........................................................................................................................................44
4.3.2. Ефекти на Ca2+, Glu и GABA върху еднокомпонентни монослоеве от SM....................48
4.3.3. Ефекти на Ca2+, Glu и GABA върху двукомпонентни монослоеве от hBest1 и SM...............................................................................................................................................51
4.3.4 Взаимодействие (смесваемост) на hBest1 и SM в моделни мембрани (Лангмюирови монослоеве).................................................................................................................................54
4.4. Асоцииране на hBest1 с детергент-резистентни и детергент нерезистентни мембрани в стабилно трансфектирани MDCKII клетки...............................................................................58
5. Изводи......................................................................................................................................60
Заключение................................................................................................................................61
Литература.................................................................................................................................62